顯微鏡常見問題

為了將光漂白的影響降至**，熒光顯微鏡可以與對熒光染料無破壞性的其他技術（如差分干涉對比度（DIC），霍夫曼調制對比度（HMC），透射暗場照明和相差）相結合。

這個想法是使用無損對比增強技術在樣本中找到特定的感興趣區域，然后在不重新定位樣本的情況下，將顯微鏡切換到熒光模式。這種類型的典型實驗的結果如圖1所示。圖1（a）示出了使用微分干涉對比度成像的大鼠視網膜視神經節組織薄切片。圖1（b）中的顯微照片顯示了相同的視場，但是這次使用熒光照明（汞蒸氣燈和奧林巴斯WU濾光片立方體）成像，其中細胞被快速藍染色的熒光染料染色，重氮鹽特異性地染色磷脂髓鞘。圖1（c）說明了兩種技術結合使用，以產生疊加在視網膜的微分干涉對比圖像上的熒光染色的視神經節脂質組織的美麗的顯微照片。該圖像用專門的螢石物鏡記錄，旨在允許同時觀察同一目標的熒光和微分干涉對比。

通常用于同時使用差分干涉對比度（DIC）和熒光照明對樣品進行成像的顯微鏡配置如圖2所示.DIC使用由安裝在顯微鏡基座上的燈箱內的鎢鹵素燈提供的透射光進行。穿過視場光闌的光線被一面鏡子反射到分鏡面聚光鏡中，并通過位于聚光鏡前焦平面的沃拉斯頓棱鏡。

由樣本衍射的光首先通過位于物鏡后焦平面附近的第二個Wollaston棱鏡，然后在未被衍射的光通過樣本的情況下干涉中間圖像平面。同時，由汞燃燒器發出的紫外光通過激發濾光器，然后由分色鏡從上面反射到樣品上。由附著于染色樣本的發色團發出的二次熒光被物鏡捕獲，并通過屏障過濾器進入目鏡和/或光電管。這種配置可以用于單獨或組合使用技術（熒光和微分干涉對比）對樣品進行成像。